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怎么挑选到适合自己试验的抗体
点击次数:203 发布时间:2017-12-25
 

怎么挑选到适合自己试验的抗体

一、关于特异性的选择:特异性的选择首要需求考虑四个方面:蛋白特异性、种属特异性、实验方法特异性、符号物的特异性。
1、ELISA试剂盒蛋白特异性:针对需求检测的蛋白查找抗体,几个细节要差异,重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测,对抗体的要求是不一样的,留心查看抗体说明书的检测说明。如果重组蛋白不是全长表达,则需求留心抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。内源性蛋白zui好能清楚其剪切与修饰的方法,特别表型的蛋白需求进行序列比对,并结合抗体免疫原序列,查看交叉反应的情况。磷酸化蛋白检测需求判定具体位点,不同位点的磷酸化意味着可能有不同的机制存在,不宜相提并论。
2、种属特异性:同种蛋白不同物种,有着或大或小的差异。现在大部分商品化抗体都是以人源蛋白序列为模板重组蛋白或规划多肽抗原的,根据蛋白的同源性的情况与其他种属发作交叉反应。需求参照说明书注明的可反应种属信息。一些稀有种属很难找到抗体,可以通过蛋白的序列比对,选择同源序列免疫的抗体,不过一般这种情况生产商不会受理其关于质量的申诉,如果可以申请到免费的抗体样品,则利于抗体选择。
3、实验方法特异性:现在运用抗体的实验方法有许多,不同的运用方法过程中,因为对蛋白样品的处理方法不一样,蛋白的含量有差异,对抗体的辨认表位和效价要求都是不一样的。具体的根据说明书注明的产品应用方法进行选择。但是生产商一般不会将每个抗体都进行各种实验的检测,现在检测比较多的只是WB、IHC、IF等,如果针对具体的实验方法没有找到适宜的抗体的,可以结合蛋白序列分析和抗体的抗原信息,选择尽可能有效果的抗体。相同,申请到免费的抗体样品是个很好的途径。
4、符号物的特异性一般根据实验操作的实验方法不会运用带有符号的一抗,比如WB、IHC等,都是通过二抗类的试剂符号抵达效果呈现的目的。但是根据仪器分析的一些实验,可能就会运用到直接符号的一抗,比如流式实验。那么需求了解到自己行将运用的仪器能检测到的荧光规划,不通的参数要求选择对应的符号物。在免疫荧光双标实验中,需求选配不同的荧光物。
二、抗体种属来历的选择:有人认为单抗比多抗好,其实这并不是一个谨慎的观念,只能说在可能性上单抗的特异性更好一些,而多抗的亲和力会优于单抗,而且特异性并不必定就逊于单抗,首要看抗原的规划水平。现在商品化抗体里单抗首要是鼠单抗、兔单抗,多抗首要是兔多抗、山羊多抗等,其他种属来历抗体较少。不建议纠结于单抗好仍是多抗好,能做出实验的抗体就是好抗体。在选择上一般建议实验种属和抗体种属亲缘性越远越好,不宜同源。抗体不同种属会要影响接下来二抗的选配。特别是在免疫荧光双标实验中,需求在差异于实验种属的基础上,差异开两个方针的抗体种属来历,以便于二抗差异辨认。
三、关于性价比的选择:抗体的质量凹凸毕竟仍是需求通过实验效果来呈现的,但是在选择抗体之前我们并无法精确判别抗体的效果怎么。不管什么品牌的,不管进口仍是国产的,都会有用得不错的产品,也都会有做不出来的产品。抗体归于异质化产品,不同品牌之间,甚至同一品牌的不同产品之间,抗体质量差异都较为显着,而且没有共同的衡量规范。这是抗体选择中zui难的一个问题。许多人习惯于根据实验室传统认识或参考文献上运用的产品进行选择,但是因为不同批次间的抗体效果也是有差异的,所以并不能彻底确保正确选择。在这种情况下,抗体的售后就尤为重要,遇到抗体质量阻碍时,可以确保有效地解决问题,不至于影响实验的开展。现在有部分品牌可以供应免费的抗体小样的,无疑对这个问题是一个很好的解决方案。先判定抗体是否适宜自己的实验,可以避免因为抗体质量投诉耽误实验安排。在价格方面,需求谨记,zui贵的不必定就是zui好的,zui适宜你的实验的才是zui好的。花许多钱买到很贵的抗体,再花上很长的时刻去投诉的情况并不稀有。只买对的,不买贵的。在选择价格的时分还要留心规范巨细、抗体浓度、效价规划等,要归纳考虑。在规范方面,根据毕竟可以稀释成的作业液的量的来衡量更为精确。许多老品牌供应的抗体产品根本都是以大包装为主,就单个课题的实验而言,过大的包装有时会形成很大的。现在Proteintech、Bioworld、CellSignal等品牌都相继推出小包装的抗体,这在必定程度上给选择者更大的选择自由度,可以根据运用产品的效价,计算出自己实践需求的抗体量,做到精判定量采购。
四、关于品牌的选择:因为抗体质量的异质化,关于抗体的品牌选择就被我们所重视,但是不管是什么品牌都难免会遇到不适宜自己实验的抗体。所以一般建议考虑那些业界广泛认可、购买便当、专业、售后处理方便的品牌。一些甚至都没有正式署理的,只能备选。一同购买时必定要找可以供应产品教导、实验分析、售后处理的正规署理商购买,避免因为买到假货水货影响实验。
五、ELISA试剂盒关于其他一些小细节:抗体选择与运用过程中,多少还会遇到一些意想不到的作业。有些细节,仍是需求多留心一些。如在选择做阻断或中和实验时,有时需求将抗体加到细胞培养液中,这是需求留心抗体是否含有叠氮钠。如果是大包装的抗体,进行分装是比较节省的方法,如果是高效价的,可以配成母液再分装。抗体的短时刻运送,用一般冰块坚持温度是可以满足要求的。其他不要纠结于WB过程中分子量的问题。许多时分,我们看到相同的抗体,不同的品牌,甚至同一品牌不同的货号,标示的分子量都不一样。其实可能只是生产商只检测时运用了不同的种属不同的样品类型,或是参照了不同的文献,对运用者来说,相同的样品,不管运用哪个品牌的,只需抗体是对的,目的条带只会呈现在相同的方位。关于分子量的问题,一般不建议看产品说明,WB中条带的方位由样品决议,并不会因为抗体不同而不同。所以在检测蛋白之前,我们可以通过数据库或参考文献,对行将检测的蛋白做个比较全面的了解,包括其可能剪切与修饰的情况、表型的情况等。在*次运用一个新的抗体时,不要根据分子量横向剪膜,可以保存几个全泳道,看看条带方位或分布的情况。

 

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